自年美国科学家詹姆斯·罗思曼、兰迪·谢克曼及德国科学家托马斯·祖德霍夫因发现细胞的囊泡运输调控获得诺贝尔生理学或医学奖,Exosome研究晋升为科研热点,热度不断攀升,年Exosome相关课题就中标两千余项。下面我们就来聊聊Exosome,干货来了,小伙伴们,接住!
图注:外泌体相关研究近年走势图
首先我们了解下Exosome的相关背景知识:
1
什么是Exosome
Exosome(外泌体)是指包含了复杂RNA(如mRNA、microRNA)和蛋白质的小膜泡(30-nm),现今,其特指直径在40-nm的盘状囊泡,广泛存在于血液、尿液、母乳和细胞培养基等生物体液中。
作为细胞间通讯及物质传递的重要载体,Exosome能调控靶细胞内多种信号通路,并根据来源母细胞类型及携带的蛋白质、不同种类的RNA等组分的差异发挥不同的生物学功能。Exosome与肿瘤转移、细胞通讯、免疫调节、细胞凋亡和自噬、细胞分化、组织再生与修复等密切相关。
Exosome来源:细胞培养液上清、菌液、血清/血浆、尿液、组织样本,盆腔冲洗液、肿瘤囊肿积液、关节冲洗液等。
2
Exosome提取
超速离心法是Exosome提取最常用的方法,这种方法硬性条件就是需要有冷冻超速离心机,得到的Exosome量比较多,但是纯度往往不足,电镜时发现Exosome聚集成块,难以判定究竟是微囊泡还是Exosome。
试剂盒提取Exosome操作简单,获取的Exosome纯度与提取效率相对较高,因而受到大多数人的欢迎,尤其适合样本量不大的小伙伴。
为了让广大科研小伙伴们可以更顺利进展实验,拓普生物推出针对不同样本的提取试剂盒,满足不同科研需求,欢迎大家选购!
产品名称
产品货号
规格
价格(元)
血清/血浆Exosome提取试剂盒
S-10
5ml
S-20
10ml
S-50
25ml
细胞培养液/尿液Exosome提取试剂盒
S-20
20ml
S-50
50ml
3
S-
ml
组织分泌液Exosome提取试剂盒
S-10
5ml
S-20
10ml
S-50
25ml
菌液外囊泡提取试剂盒
S-10
10ml
S-50
50ml
S-
ml
植物细胞Exosome提取试剂盒
S-10
10ml
S-50
50ml
S-
ml
3
Exosome鉴定
Exosome提取是第一步,之后需要鉴定,一般为三部曲:
1
NTA粒径分析
第一步,NTA粒径分析,纳米颗粒跟踪分析(NanoparticleTrackingAnalysis,NTA),是对每个颗粒的布朗运动进行追踪,可检测10nm-0nm范围内的颗粒。
2
透射电镜分析
第二步,透射电镜分析,分辨率可达0.1-0.2nm,是Exosome双层囊膜超微结构观测的经典方法。
3
标志物鉴定
第三步,标志物鉴定,根据Exosome母细胞来源,优选Exosome标志物抗体,如CD9,CD63,CD81等,通过细胞流式检测以及Westernblot检测做进一步鉴定。
4
Exosome分析是关键
众所周知,Exosome携带mRNA、miRNA和蛋白质,这些活性物质一旦进入其它细胞,很有可能引起其它细胞功能上的变化。通过高通量测序RNA,可以筛选具有代表性的差异表达的miRNA,做蛋白组学分析,可以研究发现新的蛋白标签。
锁定目标分子,探究机制,一般是通过细胞实验研究其与某种信号通路相关因子的作用关系,然后再在动物体内实验进一步验证。
5
临床研究
通过检测对应疾病患者样本中目标分子的表达水平与疾病关系,整理和分析临床病理特征信息,进一步筛选出如具有潜在早期筛查疾病的Exosome标志物等。
总而言之,Exosome研究离不开以下几步:
1、Exosome提取;
2、Exosome鉴定;
3、Exosome功能研究;
4、Exosome携带的分子功能研究;
5、Exosome分子水平的动物实验;
6、临床相关性研究。
目前,Exosome研究已经渗透到生物医学的各个细分领域,比如跟火热的干细胞强强联合,在研究各类疾病模型的治疗作用方面;比如研究植物如姜,金银花提取的Exosome对消化系统及新冠病毒的疗效作用等,毫无疑问,可以占据科研热点的C位了。
想要做Exosome研究的小伙伴们,赶紧来联系拓普生物吧~
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